Structurele en functionele studies van Chemokine-CCR5 actieve toestand complexen door middel van Nanobodies. (FWOAL804)

G-eiwit-gekoppelde receptoren (GPCR's) zijn zeer dynamische membraanreceptoren die in veel conformationele toestanden bestaan. Binding van agonisten aan de extracellulaire zijde van de GPCR stabiliseert hun actieve toestand die intracellulaire signalering triggert. Onder de grootste GPCR-liganden bevinden zich de chemokinen, met name bekend om hun rol bij het begeleiden van celmigratie tijdens ontwikkeling en immuunresponsen. Het chemokine-receptor-interactienetwerk is zeer complex en vaak binden en activeren chemokinen met weinig sequentie-identiteit dezelfde receptor. CCR5, dat zowel drie chemokinen als de HIV-envelopeiwitten bindt, is een voorbeeld van een dergelijke receptor. De determinanten die de selectiviteit en activatie van CCR5-ligand regelen, zijn onduidelijk. Structureel onderzoek van chemokine receptoren gebonden aan hun omvangrijke agonisten is moeilijk vanwege hun inherente instabiliteit. We hebben eerder het opmerkelijke vermogen van Nanobodies, de antigeenbindende fragmenten van alleen zware keten-antilichamen van kameelachtigen, getoond om GPCR-actieve toestanden of GPCR-proteïnesamenstellen te stabiliseren. In dit project willen we door het toepassen van een originele benadering van het presenteren van CCR5 gebonden aan de verschillende liganden op kunstmatige membranen (liposomen) Nanobodies genereren die de receptoractieve toestanden stabiliseren om de overspraak tussen de extracellulaire ligand-bindingsplaats en het intracellulaire signaaleiwit te onderzoeken- bindingsplaats en uiteindelijk het oplossen van de structuur van CCR5-ligandcomplexen door Nanobody-geassisteerde röntgenkristallografie.

Trefwoorden:GPCR

Disciplines:Algemene chemische en biochemische ingenieurswetenschappen niet elders geclassificeerd