Reversibele immortalisatie: op weg naar een ongelimiteerde bron van primaire humane corneale endotheelcellen als oplossing voor een verblindende ziekte.

Het corneaal endotheel is de binnenste cellaag in het hoornvlies, het raam van het menselijke lichaam. Deze cellaag is onmisbaar om de doorzichtigheid van dit weefsel te waarborgen. Wanneer zij beschadigd raken, leidt dit tot corneaal oedeem en uiteindelijk een troebel hoornvlies. De enige oplossing voor deze patiënten is de transplantatie van een nieuw endotheel afkomstig van een hoornvlies van een overleden donor. Spijtig genoeg zijn er op dit moment wereldwijd te weinig donorhoornvliezen beschikbaar voor het aantal patiënten in nood. Niet alleen zorgt dit donortekort voor lange wachtlijsten, maar wordt het onderzoek naar onderliggende hoornvliesziektes zwaar belemmerd. Dit komt niet alleen door een lage aanvoer van weefsel, maar ook omdat deze cellen heel moeilijk te kweken zijn. Zo is het mechanisme van veel hoornvliesziektes nog onbekend. In dit project stel ik voor om veel het donortekort en de moeilijke celgroei te omzeilen door het gebruik van reversible immortalization. Dit proces bestaat uit vier verschillende stappen: (1) het inbrengen van verwijderbare genen die celgroei bevorderen, (2) de positieve selectie van getransfecteerde cellen, (3) het uitknippen van deze genen en (4) de negatieve selectie van overblijvende getransfecteerde cellen. In deze oproep voor Kleine Projecten zal ik me focussen de eerste drie stappen om op lange termijn heel dit proces in kaart brengen. Hiervoor zal ik lentivirussen en een transposon systeem uitproberen. Het doel is om het transposon systeem uiteindelijk te gebruiken, maar lentivirale transductie wordt geïncludeerd als positieve controle omdat hier al veel in literatuur over staat beschreven. Nochtans is het transposon systeem hier voordeliger omdat bij het uitknippen van de genen geen sporen in het genoom worden achtergelaten.

Trefwoorden:TRANSFECTIE, OFTALMOLOGIE, REGENERATIE

Disciplines:Oogheelkunde