< Terug naar vorige pagina

Project

Ontwikkeling van conditioneel actieve enzymes gebaseerd op recombinante binders

Een belangrijke vraag in synthetische biologie en andere disciplines is hoe enzymen gemanipuleerd kunnen worden zodat hun activiteit wordt gecontroleerd door de aan- of afwezigheid van (bijna-)arbitraire stimuli. Hoewel veel enzymen worden gecontroleerd door conformationele veranderingen, is er momenteel geen algemeen framework om eiwitdomeinen te genereren die uitgesproken conformationele veranderingen vertonen als reactie op een stimulus naar keuze, wat betekent dat deze vraag momenteel grotendeels onbeantwoord is. Dit project heeft tot doel de beperking te overwinnen door het creëren van conditionele enzymen genaamd 'NanoBlocks', waarin zeer generieke affiniteitsbinders worden gecombineerd met gesplitste enzymen op een zodanige manier dat binding van het doelwit resulteert in een conformationele verandering en activering van het doelwit. In het bijzonder stel ik voor om een framework te ontwikkelen waarmee dergelijke conditionele enzymen kunnen worden gecreëerd tegen, in theorie, elk doelwit waarvoor een nanobody beschikbaar is. Praktisch gezien zal ik een screeningsysteem opzetten op basis van yeast surface display en FACS dat gelijktijdig binding en de moleculaire respons kan volgen. De resulterende methodologie zal worden gebruikt om twee van dergelijke enzymen te ontwikkelen, een hulpmiddel voor het conditioneel in kaart brengen van interacties, evenals een hulpmiddel om nieuwe signalling pathways te ontwikkelen via conditionele protease-activiteit.

Datum:1 okt 2023 →  Heden
Trefwoorden:Biosensor development, Protein engineering, Conditional enzymes
Disciplines:Cellulaire signaaltransmissie, Moleculaire en celbiologie niet elders geclassificeerd, Synthetische biologie