De rol van -1 geprogrammeerde ribosomale frameshifting ontregeling op het JAK2 oncogen

De Janus Activated Kinase 2 (JAK2) V617F mutatie zorgt voor constitutieve activatie van het JAK2 kinase en de JAK-STAT signaalweg in myeloproliferatieve aandoeningen (MPD). Hoewel de sterk transformerende capaciteit van deze mutatie wordt toegeschreven aan de V617F aminozuurverandering in het JAK2 proteïne, wijzen onze preliminaire data op een bijkomend regulatorisch mechanisme op het niveau van het mRNA genaamd -1 geprogrammeerde ribosomale frameshifting (-1 PRF). De nucleotideverandering verantwoordelijk voor V617F verstoort vermoedelijk de secundaire mRNA structuur van het -1 PRF signaal, resulterende in een toename van mutant JAK2 mRNA en proteïne expressie. Hoewel virale -1 PRF signalen intensief onderzocht zijn, is dit mechanisme slechts weinig begrepen in humane cellen. Dit project zal het eerste zijn om het JAK2 -1 PRF signaal en de ongekende functie in humane aandoeningen diepgaand te karakteriseren. Hiervoor worden specifieke nucleotide mutaties ingebracht in de endogene JAK2 locus in een humane myeloïde cellijn via CRISPRCas9. Verdere experimenten – gedeeltelijk in internationale samenwerking met het J. Dinman Lab (Universiteit van Maryland, USA) – onderzoeken het effect van de PRF signaal mutaties op de mRNA structuur, proteïne product en functionele implicaties. Bovendien zal het reguleren van de PRF activiteit onderzocht worden als potentieel nieuwe therapeutische aanpak voor de verbetering van MPD therapie.